『壹』 生殖器皰疹病毒的診斷
原發性生殖器皰疹感染潛伏期約為3～天，患部先有燒灼感，出現紅斑，很快在紅斑的表面發生3～10個成簇分布的小水皰，數日後成為小膿皰，破潰後形成糜爛面和淺潰瘍，局部紅腫，有燒灼樣疼痛。女性病人多發生於陰唇、肛門周圍、陰道，但約90%的病人可同時侵犯子宮頸引起子頸炎或子宮炎；男性病人多發生於龜頭、冠狀溝、尿道口或陰莖體，有時可並發尿道炎。大多數患者有雙側腹股溝淋巴結腫大。
生殖器皰疹多發生在皮膚和粘膜的交界處，先是局部皮膚輕度發紅，繼而發出成群的像針尖大小的小水皰，有輕度發癢和燒灼的感覺，幾天後就變干而結成棕色的痂，痂脫落後有輕微的色素沉著，但也很快就消失，全部病程平均一星期，但常見復發。
自查
如何檢測是否感染了生殖器皰疹病毒？可以參照以下症狀進行自檢：
1、發生過不潔性行為；
2、生殖器部位有燒灼感並很快長出成群的小水皰；
3、水皰可逐漸變成膿皰，約6天左右破潰；
4、患處出現糜爛或淺的潰瘍，伴隨疼痛；
5、病人可發生尿道炎，出現排尿困難；
6、多數人有腹股溝淋巴結腫大疼痛；
7、出現發熱、頭痛、肌肉痛及腦膜炎等伴隨症狀。
生殖器皰疹與HIV感染的關系
生殖器皰疹是由單純皰疹病毒(HSV)引起的常見性傳播疾病，是主要的生壤器潰瘍性疾病，而且有反復發作和致癌特性。國外研究表明人類免疫缺陷病毒(HIV)感染及傳播與生殖器潰瘍性疾病有密切關系，而國內相關報道有明顯差異。為此，我們對以生殖器皰疹為主要表現的患者進行病因檢測分析，並探討其與HIV感染的關系。
近20年來，生殖器潰瘍性疾病(CUD)發病率不斷上升，有關GUD與HIV感染的相關性國內外研究結果不一。國外許多資料表明，GUD與HIV的感染和傳播有著非常密切的關系，GUD中HIV感染率為22．29%。主要通過性傳播感染，CUD患者對HIV呈易感狀態。HIV/AIDS造成酶聯免疫缺陷可導致CUD的發生，並呈現特殊的臨床表現，而GUD又可以促進艾滋病的感染與傳播。
生殖器皰疹發病原因多樣，HSV與HIV感染的關系尚有待進一步研究，但有針對性的評估其危險因素，採取相應的預防措施，提倡安全性行為是預防性傳播疾病的有效方法，早期診斷和治療生殖器皰疹，對促進患者皮損癒合，降低其傳染性及危害性有重要意義。
生殖器皰疹與HIV檢測
可以選用膠體金法（免疫層析法）人類免疫缺陷病毒（HⅣ 1/2）抗體檢測試劑盒進行檢測。此類產品是應用膠體金免疫層析技術建立的靈敏、特異、操作簡便的一步法HⅣ 1/2抗體定性檢測試劑。用於定性檢測人血清或血漿樣本中的HⅣ 1型和HⅣ 2型的特異性抗體，以輔助診斷HⅣ感染，其陽性結果需用免疫印跡法確認。唾液檢測試紙全球認可度比較高的是美國克利普特公司的aware愛衛品牌。
『貳』 男性得生殖器皰疹有什麼症狀男性生殖器皰疹常見5大症狀
男性生殖器皰疹的症狀是什麼？男性生殖器皰疹的症狀，龜頭冠狀溝小腫塊引起的皮膚損傷主要發生在男性包 皮膚、龜頭、冠狀溝和陰莖，偶爾出現在尿道口；原發性生殖器皰疹，常伴有全身不適、低熱、 頭痛等全身症狀，局部淋浴腫大。生殖器皰疹經常復發，復發性生殖器皰疹比原發者輕，損傷小，往往沒有全身症狀。
男性生殖器皰疹的症狀是什麼？
1.原發性生殖器皰疹症狀：
潛伏期：短，2~7天，平均5天。頭發好：男性多發生在龜頭、陰莖、尿道口、陰囊、大腿、手臂等，女性多發生在陰唇、宮頸、外陰等，陰道粘膜受累較少。
皮膚損傷的形式和演變：生殖器皰疹感染潛伏期後，上述部位有燒灼感或刺痛，然後出現紅斑伴瘙癢小紅丘疹，迅速變成小水泡，多個成群水泡可變成膿皰。~5天後，小泡破裂，形成糜爛或潰瘍，然後結痂癒合，病程約15~25天。自覺瘙癢、灼熱、輕度腫脹，潰瘍疼痛明顯。
全身症狀及並發症：生殖器皰疹發病前夕或發病時可有全身症狀，如發熱、頭痛、不適、頸部強直感、S2 ~ S4 段感覺異常，或排尿困難，白帶增多，幾乎所有原發性GH可伴有淋巴結腫大、壓痛，常為1~兩個月後慢慢消退。男性常並發淋巴管、淋巴結炎和精囊炎，女性可並發宮頸炎和子宮內膜炎。嚴重者可合並腦膜炎、尿道炎、急性尿瀦留和宮頸癌。
男性生殖器皰疹症狀2.復發性生殖器皰疹症狀：原發性生殖器皰疹癒合後約1~4月份復發，主要是因為潛伏在神經中的病毒再次被激活。誘發因素有發熱、 性交、精神刺激、月經來潮、精神刺激後情緒波動、氣候寒冷、消化不良等。其特點是：復發部位大多在原處，全身症狀一般較輕，病程較短，皮膚損傷約10天 消退，皮膚損傷開始為水泡或膿皰，1~2天後破裂侵蝕，皮損多為單側分布。HSV — Ⅱ近60%的感染可以復發HSV —Ⅰ只有14%的發。第一年可復發4次。~六次後，復發次數逐漸減少，不僅疾病本身反復發作，難以控制，而且精神壓力和性功能障礙也是一個巨大的負擔 。
男性生殖器皰疹的症狀3。孕婦生殖器皰疹的症狀：孕婦和新生兒感染生殖器皰疹的後果更嚴重。首先，孕婦的感染率約為2~其次，早產、流產和死產的風險在感染後大大增加。即使胎兒分娩，也是因為HSV異常敏感約為50%~60%的新生兒會死亡並倖存下來，並且經常會留下嚴重的神經系統（如腦炎）或眼睛（如角膜炎）後遺症。
4.新生兒生殖器皰疹的症狀：新生兒生殖器皰疹通常在出生後2~發病12天，臨床表現發生很大變化，骨髓、肺、肝、中樞神經系統等多器官受 累，死亡率高，皮膚損傷看起來不嚴重~2個水皰，20%~30%的患兒感染後無皮損，表現為神經系統症狀或敗血症。
男性生殖器皰疹症狀5，男性同性戀者HSV — Ⅱ感染症狀：主要表現為嚴重肛門、直腸疼痛、便秘、直腸分泌物過多、內急後重、發熱等。部分患者肛周有水泡或潰瘍。
男性男性生殖器皰疹的症狀是很容易分辨的，需要提醒的是，在治療過程中一定要堅持夫妻同治，以免互相感染，遷移不愈。另外在生活中也要注意潔身自好，注意個人衛生，避免不潔性接觸。
『叄』 女性生殖器皰疹會有什麼明顯表現
當女性朋友在患上生殖器皰疹後會有灼熱的感覺出現，之後就會在長紅斑的地回方長出成片的答小水皰。而小水皰的位置一般在女性的陰唇和宮頸以及陰蒂和陰道的位置，水皰會慢慢的化膿，最後破潰，就會形成糜爛或者是較淺的潰瘍。當它發生在尿道，患者就會感覺疼痛感，而且在排尿的時候會非常的困難。 有些女性患者會出現腹股溝淋巴結腫大而感到疼痛，有些患者會出現發熱和肌肉疼痛以及腦膜炎的現象。如果疾病是發生在女性宮頸處時，就會形成潰瘍壞死現象，陰道分泌物會增多，從而感到下腹疼痛。 當女性在患上生殖器皰疹時還會滋生出其它的並發症，例如陰道周圍會出現一些小水泡或者是潰瘍，甚至還會影響到陰道內部。這種潰瘍一般會使患者出現疼痛和非常癢的現象，同時還會出現外陰部位變成紅色或者是腫脹的情況。
『肆』 生殖器皰疹的症狀有哪些
一、症狀
HSV感染是一種全身性疾病，病毒經呼吸道、口腔、生殖器粘膜或破損皮膚進入人體，可潛於人體正常粘膜、血液、唾液以及局部感覺神經節和多數器官內，幾乎所有的內臟和粘膜表皮內都可分離到HSV。
原發感染多為隱性，大多無臨床症狀或呈亞臨床表現，僅有少數(約1-10%)可以出現臨床症狀。主要見於免疫功能低下嬰幼兒或嚴重營養不良或有其它感染的兒童，成人罕見。原發感染消退後，病毒可持續潛居體內。正常人中約有半數以上為本病毒的攜帶者，可通過口、鼻分泌物而成為傳染源，由於HSV在人體中不產生永久免疫力，故每當機體抗病能力減退時，如患某種發熱性傳染病，胃腸功能紊亂、月經、妊娠、病灶感染、過度疲勞、情緒環境改變時，體內潛伏的HSV即被激發而發病。
HSV-1主要引起口唇皰疹，咽炎，角膜結膜炎和散發性腦炎，而HSV-2感染主要引起生殖器皰疹，但在臨床上也有相反情況。
HSV感染的潛伏期為1-45天，平均為6天，HSV-1感染主要發生於口角、唇緣、鼻孔等皮膚粘膜交界處，亦可見顏面或口唇，開始局部先有灼癢及輕度緊張感，偶有伴發神經痛。隨即出現紅斑，在紅斑基礎上發生簇集性小丘疹，迅速變為粟粒至綠豆大小的水皰，內容澄清，水皰破裂後出現糜爛面，數日後乾燥結痂。自覺灼癢，偶有倦怠，不適和輕微發熱等全身症狀，癒合可遺留暫時性色素沉著。全病程1-2周左右。
HSV-2感染主要發生於生殖器部位，患部先有燒灼感，很快在紅斑的基礎上發生成群的小水皰，多見男性包皮、龜頭、冠狀溝、陰莖等處，偶見於尿道;女性常見於陰唇、陰蒂、陰道、宮頸等處。水皰可逐漸變成膿皰，約6天左右破潰而形成糜爛或淺的潰瘍，自覺疼痛。病人可發生尿道炎，出現排尿困難。多數人有腹股溝淋巴結腫大疼痛，有的病人可出現發熱、肌肉痛及腦膜炎症狀。如發於女性宮頸者可形成潰瘍壞死，陰道分泌物增多，可有下腹痛。應注意有無宮頸癌發生。孕期患生殖器皰疹時易致流產、早產或死胎，並易使新生兒感染，發生新生兒單純皰疹。本病一般經過3周左右可以痊癒，但常有反復發作，一般原發疹後1-4個月內復發，症狀較原發者輕，范圍亦小，局限於生殖器部位，有時僅有1-2個皰疹，病程亦短，自發病至癒合8-12天。本病也可伴有生殖器以外部位的感染，如口唇、臂部及中樞神經系統等。
二、體征
皮損為紅斑基礎上可見成群的水皰或膿皰或成糜爛及潰瘍。女性患者約90%伴有HSV宮頸炎，宮頸可見發紅、糜爛、潰瘍，有膿性陰道分泌物。有的患者可有腹股溝淋巴結腫大壓痛或體溫升高。皮膚病變也可出現在口唇、手指、臀部、大腿、手臂，甚至眼部與咽喉。並發腦膜炎或橫貫性脊髓炎，一般於發疹後3-12天出現頸項強直等顱內壓增高的現象。
三、潛伏感染和復發
HSV感染人體後1周左右，血中出現中和抗體，3-4周達高峰，可持續多年，這些抗體能清除病毒和使機體康復，但大多數個體不能徹底消滅病毒，也不能阻止復發，病毒以潛伏狀態長期存在宿主體內。不同亞型HSV感染者急性首發生殖器皰疹的臨床過程相似，但生殖器病變復發率不同，首發HSV-2感染者約90%，在12個月內會出現一次復發(平均復發4次)，而初次感染HSV-1者僅50%出現類似復發(平均復發次數小於1)。不同個體及同一病人一生中生殖器HSV-2感染的復發率變化很大，大多數年復發5-9次，一般在原發皰疹消退後1-4個月內發生，有些患者受到促發因素，如發熱、月經、日曬、寒冷、某些病毒感染等的影響而復發，其特點是每次復發往往發生在同一部位，復發前可有前驅症狀如局部瘙癢，發疹前數小時感染部位有灼燒，麻刺感。
復發生殖器皰疹(GH)對患者心理影響較大，由於目前尚無預防復發的有效療法及可能有誘發生殖器惡變的危險性，故給患者帶來心理影響，患者多有抑鬱、恐懼等心理障礙，這又直接影響HSV的復發。我們的治療經驗，只要患者堅持規律治療，都能治癒。
四、HSV與HIV感染：
HSV常與HIV-1同時感染，並能促進病情發展，引起嚴重的局部和播散性感染。目前認為HSV是一種調節因素，能激活HIV復制，Heng對6例AIDS合並生殖系統HSV皮膚損害患者進行皮膚活檢，發現角化細胞和巨噬細胞均有HIV-1和HSV-1雜交後使HIV-1保留其感染性，而無需與CD4分子結合即能進入細胞內。此外HSV-1能刺激潛伏型HIV-1，而增加HIV-1/HSV-1共同感染和在組織中的復制。
表皮細胞發生氣球樣變性，其中可見有嗜酸性包涵體。表皮開始為網狀變性形成的多房性水皰，以後聚合為單房性水皰。真皮乳頭層有輕度水腫，有輕重不等炎性細胞浸潤。反應嚴重時可有嚴重血管炎表現。
HSV感染的診斷要依據病史、臨床表現和實驗室檢查結果而定。有不潔性交史，而且在生殖器部位出現皮膚紅斑和原發性水皰，易復發等不難診斷。必要時可作皰液塗片，培養、接種、免疫熒光檢查。血清免疫抗體測定等，均有助於診斷和確定病毒類型。
一、細胞學方法
對皮損刮片做Wright-Gemsa(Tzanck試驗)或Papanicolaou染色，可檢出HSV感染特徵的巨細胞包函體，但不能區別HSV感染或水痘―帶狀皰疹病毒感染，敏感性僅為病毒分離的60%。
二、培養法
從水皰底部取材做組織培養分離病毒，為目前較敏感、最特異的檢查方法，需5-10天，因其技術條件要求高，價格昂貴，不能普遍使用。
三、抗體檢測
目前最廣泛的是HSV-2抗體檢測，如蛋白印跡法也可用gD2作抗原檢測HSV-2抗體，具有敏感性，且能區分HSV-1和HSV-2的優點。
四、基因診斷
(一)用PCR分型檢測單純皰疹病毒
PCR是一種敏感性高，特異性強的快速檢測方法，標本中含有1fgHSV-DNA就可以檢出，其在HSV感染的診斷研究中發展較快，且分型檢測HSV是發展的趨勢。
1、標本採集和處理
(1)標本採集
①腦脊液：直接無菌採取患者0.5ml腦脊液標本於無菌試管送檢.如肉眼可見血色，應離心取上清。
②羊水及嬰兒血清:同上，應避免溶血.
③腦組織:腦組織屍檢、活檢標本，加1mlPBS標本緩沖液研磨後，待檢。
④眼及皮膚病灶分泌物：用預測(半干)棉拭子直接取患處分泌物，置1mlPBS標本緩沖液中送檢。
⑤生殖器(宮頸、陰道、外陰、陰莖)標本：先用消毒棉拭子擦去病變部位表面粘液、污垢，再用預潮棉拭子用力擦拭患處分泌物，置1mlPBS標本緩沖液中送檢。
(2)標本處理
①預處理：所有液體標本均可直接進行模板制備;可以取100μl標本液，離心5000r/min×5min後，去上清，取沉澱物進行模板制備。
②模板制備：a:蛋白酶K消化裂解法：沉澱物加100μl蛋白酶K消化裂解液，55℃1h後，煮沸10min，離心5000r/min×5min，收集上清。b:水煮法：沉澱物加100μl蒸餾水，搖均水煮20min，離心5000r/min×5min收集上清。c:1%TritonX-100裂解法:取採集的標本液100μl，加入1μlTritonX-100，水煮20min，5000r/min×5min，收集上清。d:5%NP-40裂解法：取採集的標本液100μl，加5μlNP-40，水煮20min，5000r/min×5min收集上清。e:如標本溶血嚴重經上述裂解處理後，再加等體積酚-氯仿抽提、冷乙醇沉澱DNA，加10μlDW溶解待檢。
2、PCR擴增
(1)引物設計。以HSVDNA聚合酶的高保守區為檢測靶序列以確保特異性。設計3個引物，一個上游共同性引物，DNAP5(5′ATGGTGAAAACATCGACATGTACGG3′)：二個下游特異性引物，DNAP3-1(5′CCTCGCGTTCGTCCTCGTCCTCC3′)和DNAP3-2(5′CCTCCTTGTCGAGGCCCCGAAAC3′)，可以分別擴增出HSV-1469bpDNA片段(1981～2359)、HSV-2391bp片段(1561～1953)：從二型PCR擴增產物中設計了一個不分型的特異性探針HSVP35『GGCGTAGTAGGCGGGGATGTCGCG3『)。
(2)PCR實驗體系。取模板10μl：DNAP50.5(0.2μmol/L)：DNAP3-10.5μl(0.2μmol/L)：DNAP3-20.5μl(0.2μmol/L)：4×dNTP8μl(4×200μmol/L)：10×dNTP8μl(4×200μmol/L);10×緩沖液10μl：DMSO4μl;加DW65.5μl;石蠟油30μl.。
水煮(96℃～100℃)7min
加TaqDNA聚合酶1μl;(2.5U)
72℃4min
↓
95℃40s
↓
65℃60s→72℃70s
↓33個循環
70℃4min
3.擴增產物的檢測和分析
(1)瓊脂糖凝膠電泳染色法：取擴增產物20μl加樣品緩沖液4μl混勻後，點樣於2%瓊脂糖凝膠板，70V電泳15～20min，溴化乙錠(EB)染色5min，於紫外燈下觀察結果在溴酚藍後面有一條或二條亮紅帶為陽性結果，HSV-2帶在前，HSV-1帶在後，無帶則為陰性結果。
(2))XhoI酶譜法：取HSV-1型PCR產物50μl加XhoI50U，37℃1h後，置3%瓊脂糖凝膠中，70V電泳15～20min，可產生46bp片段帶(引物後面);與正常PCR產物比較，XhoI酶切後的大片段電泳位置前移。
(3)Southern印跡法：PCR產物20μl經電泳分離後，用變性液處理60min，再用中和液處理90min，轉移至硝酸纖維素膜上：80℃烤膜2h，42℃預雜交(雜交液中)30min，加入32p標記HSVP3探針後，42℃雜交過夜;次日用1%SDS/PBSpH7.2，42℃洗15min，0.5%SDS/PBSpH7.2，42℃洗15min;膜置X線暗盒內放射性自顯影12～15h，顯影為陽性，不顯影為陰性。
(二)套式PCR
套式PCR(nestedprimers-polymerasechainreaction，NP-PCR)是通過「外側」、「內側」兩對引物，即一對擴增較大DNA片段的「外側」引物和一對位於擴增產物中再擴增小片段的「內側」引物，這樣兩次連續放大可以提高PCR檢測的靈敏度，保證產物的特異性。但該方法不能分型，能100%檢出HSV-1，50%檢出HSV-2，應改進分型檢測HSV，更好地在臨床應用和基礎研究中推廣應用。
1、標本處理：
(1)標本採集同上
(2)DNA制備：①腦脊液：取100μlCSF水煮15min，加入250μl無水乙醇，放-30℃10min;離心10000g30min，去上清，30℃乾燥後，加入10μlDW;②腦組織細胞：取沉澱物加100μl蛋白酶K消化裂解液，56℃作用1h，水煮10min;取上清加入等體積酚一氯仿(V/V)，輕搖10min，離心10000r/min×10min;取水相，加入250μlDW溶解。
2、PCR擴增
(1)引物設計：選擇HSV1糖蛋白D基因為檢測靶基因。
NP-PCR的引物和探針序列
「外」引物
BJHSV1.1ATCACGGTAGCCCGGCCGTGTGACA19-43
BJHGV1.2CATACCGGAACGCACCACACAA218-239
「內引物」
BJHSV1.3CCATACCGACCACACCGACGA51-79
BJHSV1.4CGTAGTTGGTCGTTCGCGCTGAA166-188
探針
BJHSV--125
(2)PCR實驗體系和程序:反應體積為50μl;模板10μl;BJHSV1.10.5μl(0.2pmol/L);BJHSV1.20.5μl(0.2pmol/L);10×緩沖液5μl;4×dNTP4μl(4×200mmol/L);DW27μl;石蠟油30μl。循環參數為95℃30s;55℃30s;72℃60s;循環20次，取其擴增產物1μl加入含有BJHSV1.3和BJHSV1.4反應體系中進行套式擴增，先95℃變性2min，循環參數為95℃30s;55℃30s;72℃60s;循環30次後，72℃延伸5min;。
(3)擴增產物分析：
①瓊脂糖凝膠電泳染色法：
取擴增產物10μl點樣於2%瓊脂糖凝膠中，70V電泳15-20min，溴化乙錠染色5min，於紫外燈下觀察結果，在溴酚蘭後面有一條，或二條亮紅條帶為陽性結果，HSV-2帶在前，HSV-1帶在後，無帶則為陰性結果。
②Southern印跡法：
PCR產物20μl經電泳分離後，用變性液處理60min，再用中和液處理90min，轉移至硝酸纖維素膜上，80℃烤膜2h，42℃預雜交(雜交液中)30min，加入32P標記HSV探針後，42℃雜交過夜，次日用1%SDS/PBSpH7。2，42℃洗15min，0.5%SDS/PBSpH7.2，42℃洗15min;膜置X線暗盒內，放射性自顯影12-15h，，顯影為陽性，不顯影為陰性。
(三)、聚合酶鏈反應―酶譜法(polymerasechainreaction-endonucleasecleavagePCR-EC)
具有經濟廣泛等特點;不僅能一次性分型檢測HSV-1，HSV-2，EBV，CMV四種病毒，而且方法本身快速、方便、無放射線損傷，易被實驗室接受。可檢出3個CFU的HSV1，靈敏度高，能檢測出中樞神經系統感染第1dCSF中HSVDNA陽性結果，並可用於葯物治療效果的評價。由於病毒的變異性，會出現酶切點突變丟失現象，從而造成酶切陰性結果。對此可以通過型特異性探針或序列分析解決。
1.標本處理
(1)標本採集，方法同上。
(2)DNA模板制備：每份標本取200μl，按200μg/ml加入蛋白酶k，56℃作用1h;
加入等體積的酚―氯仿(v/v)輕搖10min，離心1000r/min×5min;取水相加入500μl(2.5倍體積)無水乙醇，-20℃過夜沉澱DNA，離心15000r/min×5min，吸去液體，30℃乾燥後，加蒸餾水25μl溶解，待檢。
2.引物設計：
P1，5′CGACTTTGCCAGCCTGTACC3′
P2，5′AGTCCGTGTCCCCGTAGATG3′
(1)PCR實驗體系：
反應體積100μl;模板10μl;P10.5μl(10pmol/L)，P20.5μl(10pmol/L);4×dNTP4μl(4×200mmol/L);10×緩沖液10μl，DMSD5μl，DW65μl，循環參數為94℃60s;60℃60s;72℃60s;循環40次72℃延伸4min。
(2)擴增產物檢測與酶切分型.
①第一步電泳鑒定:取10μlPCR產物加4μl樣品緩沖液，加入2%瓊脂糖凝膠板，70V電泳(5-20min)加EB染色5min後，紫外燈下觀察，可初步鑒定擴增產物大小。
②酶切分析：分別取20μlPCR產物於2個Eppendorf管中，加入50μl無水乙醇，-20℃沉澱DNA，再分別用20μlSmal和BamHI反應緩沖液溶解，加入SmaI或BamHI50U於相應Eppendorf管內，37℃作用1h。
③第二步電泳分型，取10μlPCR酶切物加4μl樣品緩沖液，加到2%瓊脂糖凝膠中，70V電泳，15-20min後，EB染色5min，與同步加入未酶切的PCR產物相對照。紫外燈下觀察，結果如下:
PCR-EC法檢測四種病毒結果
病毒型號靶片段SmaIBamHI
HSV1518bp476bp+42bp
HSV2518bp―225+293bp
EBV524bp100bp+424bp277bp+247bp
CMV589bp不需酶切，第一步電泳就可以區分
(四)用RT-PCR檢測單純皰疹病毒
RNA的聚合酶鏈反應(RNA-PCR)，可能通過檢測HSV不同期的RNA，這不僅可診斷HSV感染，而且有利於HSV的潛伏期感染機制的深入研究。
RT-PCR是以RNA為模板經逆轉錄反應(RT)產生cDNA，再以cDNA為模板進行PCR擴增以達到檢測目的。因此，RNA-PCR也可稱為RT-PCR。
1、標本處理：
組織塊細胞總RNA提取，取100mg組織標本，加1ml硫氰酸胍變性液，於勻漿器中，室溫研磨均勻後，移入2.5mlEppendorf管中。依次加入0.1ml3mol/L(pH4.0)NaAc，1ml水飽和酚和0.2ml氯仿一異戊醇混勻，用力振搖10s，置冰浴15min。10000g4℃，離心20min，取上清水相(上層DNA、下層DNA和變性蛋白質)加入等體積異丙醇置-20℃1h，沉澱RNA。離心15000r/min×10min，棄上清，RNA重新用0.3ml硫氰酸胍變性液溶解，再加0.3ml異丙醇沉澱，-20℃1h，沉澱RNA.離心15000r/min×10min，去上清，沉澱RNA用75%冷乙醇洗一次，真空乾燥。.加10μlTE緩沖液(pH7.4)溶解，低溫保存備用.臨用前冰浴溶解。
2、PCR擴增:
(1)引物設計:選擇HSV-1ICPO基因(極早期)為檢測靶基因.設計2個引物，
P15′GGATCCTCACGTGGTTACCCGCGGTCT3′
P25′AAGCTTCCGGGGCCGTCCCCGCGGGCG3′可以擴增ICPO中266bp序列。
1個探針：5′CCGGCTGGAGCCGCCGCACCCTGCT3′。
(2)PCR實驗體系：總反應體積為50μl，模板10μl(0.25-1.0μg)P11μl(20pmol/L);P21μl(20pmol/L);4×dNTP4μl(200μmol/L);10×緩沖液5μl;AMV(逆轉錄酶)2μl(50U);DW26μl;循環參數，94℃變性2min後94℃50s，60℃60，72℃60s，循環40次後72℃延伸5min。
3、擴增產物的鑒定：
(1)瓊脂糖凝膠電泳染色法：取10μlPCR擴增產物加4μl樣品緩沖液，混勻後加樣2%瓊脂糖凝膠板，70V電泳15-20min，EB染色5min。紫外燈下觀察擴增條帶。
(2)Southern印跡雜交法：用32P標記的特異性探針檢測PCR產物，方法同上。
總之，在HSV感染性疾病的臨床診斷中，PCR能對前病毒或潛伏期低復制的HSV特異性靶DNA片段進行擴增檢測，遠較DNA探針敏感，並能在血清中抗體出現前就可以檢出。因此，PCR無論是作為基礎研究手段，還是作為臨床檢驗診斷方法，均具有廣闊的前景。
五、病理組織學診斷
細胞內水腫，基底層形成大水皰，病灶周圍有多核巨細胞浸潤，特別是多核白細胞與淋巴細胞充斥於病灶中間。
1.原發性GH
(1)潛伏期：為2～7天，常為3～5天。
(2)好發部位：男性多發生於龜頭、冠狀溝、尿道口、陰莖體及陰囊。女性好發於外陰、陰道及宮頸。兩性均可見於肛周、大腿及臀部。
(3)皮損形態及演變：患處先有燒灼感，隨即出現多個群集的紅色斑丘疹，並迅速變成小水皰。皰液起初清亮，以後漸變為膿性。水皰易破潰，形成糜爛或淺潰瘍，伴明顯疼痛。之後結痂而愈，病程約2～4周。
(4)全身症狀：發病前或發病時可有全身症狀，如發熱、頭痛、全身不適、頸項強直和骶2～4段感覺異常，或有排尿困難和白帶增多。幾乎所有患者均可伴腹股溝淋巴結腫大及壓痛。
2.復發性GH
約在原發性GH痊癒後1～4個月發生。首次HSV-2感染後1年內近60%的患者復發，第1年內可復發4～6次，以後復發次數減少。eves等發現在生殖器感染者中，HSV-1感染者復發率為14%，而HSV-2感染者則有60%復發。
復發性GH患者可有上述激發因素，或有前驅症狀，全身症狀較輕，復發部位多在原處，病程也較短，皮損約經10天左右即消退。由於病損反復發作，難以控制，患者易出現精神負擔和性功能障礙，甚至發生抑鬱症等。但其損害與原發性者甚為相似。
3.特殊型GH
(1)男性同性戀者GH：本病僅次於淋球菌引起的肛門直腸炎。有人從62例有肛門直腸症狀但淋球菌檢查陰性的男性同性戀者中，29%檢出了HSV-2。臨床表現多為嚴重的肛門、直腸疼痛，其他症狀為便秘、肛門內有分泌物、里急後重和發熱等。部分病人肛周有水皰或潰瘍。
(2)孕婦和新生兒GH：孕婦患GH後，其後果嚴重。對妊娠GH患者HSV-2攜帶者來說，最重要的是傳染給新生兒。當產道內存在HSV-2時，可有40%～60%的新生兒遭受感染，感染嚴重者可致死亡。
在妊娠早期，患GH的孕婦可影響胎兒，導致流產或死胎。新生兒的先天性感染，出生時可出現帶狀分布的皰疹、癲癇發作、出血傾向與肝脾腫大。如通過產道感染或胎膜早破而發生逆行感染時，輕者出生後數日至數周可無臨床症狀，早期可僅有吃奶較差、興奮，以後可發生病毒血症或皰疹性腦炎，重者發生播散性HSV感染，可出現高熱、呼吸困難、出血及中樞神經系統病變，預後不良。
因此，妊娠足月患GH者，如時間允許，應每周從陰道及子宮頸取材，檢查有無病毒感染，若細胞學或病毒培養陽性而羊膜尚完整，或破裂後不足6h，建議剖宮產，以避免胎兒經陰道分娩而發生新生兒HSV感染。
HSV-2感染與宮頸癌：有證據表明，生殖器HSV-2感染可能與宮頸癌的發生有關。血清流行病學檢查發現，宮頸癌患者血清中抗HSV-2抗體較對照組婦女明顯增高。Nahmias等發現，GH患者發生宮頸非典型增生者為對照組的2倍，而發生原位癌者則為對照組的8倍。近年來研究證明，患侵襲性宮頸癌和癌前期病變的婦女宮頸脫落細胞中,HSV-2抗原陽性率明顯高於對照組，這種HSV-2抗原位於腫瘤細胞的胞質內，提示為腫瘤細胞表達的病毒抗原。有人發現，宮頸有高度非典型增生、原位癌及鱗狀細胞癌者的活檢組織中，用間接免疫熒光染色可發現其中的HSV-2抗原。應用DNA-RNA原位雜交技術在宮頸癌和癌前期組織中67%可發現HSV-2特異性mRNA。Frenkel等在宮頸癌組織中檢出HSV-2的DNA。還有作者從手術切除後經放射的宮頸癌病變組織中分離出了HSV-2。
HSV-2感染與HIV感染與其他生殖器潰瘍性疾病一樣，GH增加了HIV感染的危險性。HSV感染是HIV感染的輔助因子。在HIV感染者尤其是HIV感染的同性戀者中，HSV-2感染率更高，且GH的並發症多而嚴重。在AIDS患者中，耐阿昔洛韋(無環鳥苷)的HSV毒株感染多見。
根據病史、症狀和皮膚或黏膜表現，一般不難作出診斷。必要時可進行實驗室檢查，以明確病原體。
中醫病機和辨證本病多因體內蘊熱，外感毒邪，熱毒相結，肝膽二經濕熱下注而生;或因肌膚虛弱，邪毒留膚，遇熱即發。
中醫辨證分型
1.濕熱下注型
主證：患處水皰、糜爛、癢痛交作，大便秘結，小便短赤。舌紅，苔黃膩，脈弦滑數。
辨證：濕熱下注，外感毒邪。
2.肝腎虧損型
主證：病情反復發作，兼有心煩寐少，腰酸頭昏，食少乏味，口乾咽燥。舌質淡，脈沉細。
辨證：清熱化濕，養肝滋腎。
『伍』 生殖器皰疹有什麼危害
女性如果感染了生殖器皰疹，可以導致外陰炎，外陰奇癢難忍。陰道炎，導致性生活時性交疼痛。可以導致子宮頸炎、子宮內膜炎，然後導致精子不能著床，最後導致不孕不育或者流產。患者常常有排尿困難，或者白帶增多。另外陰唇、宮頸和陰道，以及肛門周圍都可以有小水泡或者膿皰。症狀明顯時，走路都很難。如果男性導致了生殖器皰疹，一般在冠狀溝、龜頭、尿道口及陰莖上出現水泡，可以導致前列腺炎，造成精液的不液化，也可以導致性腺分泌物的生理功能異常，最後導致不孕不育。